高中生物实验：植物组织培养

概要：000ml细口瓶中，不可由容量瓶直接倒入细口瓶中；⑷注意观察母液中是否有絮状物，出现絮状物表明离子之间发生反应，需要重新配制母液；⑸植物生长调节剂难溶于水，需要碱或酸助溶，一般生长素类物质用碱（0.1mol/LNaOH1～3ml）或酒精（75～95％的酒精1～3ml）助溶，细胞分裂素类物质一般用酸（0.1mol/LHCL1～3ml）助溶，加入蒸馏水定溶时要缓慢，也可用水浴法助溶；⑹用棕色细口瓶盛装有机物母液和植物生长调节剂母液，避免透射光损害母液中的有机成分；⑺在瓶壁上贴好各种母液的标签（下图所示）；⑻将配制好的母液放入冰箱中或阴凉处保存。MS是穆拉希吉（Murashige）和斯库克（Skoog）两位科学家第一个字母的缩写，他们于1962年为培养烟草而设计了一种培养基，这就是组培使用中最为广泛的MS培养基；标签中间一行的数字及单位表示的意义如下，例如，100ml/L，即配制1升培养基只需从母液中提取100ml即可；50mg/100ml，表明100ml母液中含有50mg萘乙酸，如取4mg的萘乙酸，只需提取8ml母液。除母液需提前配制好外，消毒液也需要提前配制好。外植体消毒一般采用75％的酒精、2～10％的次氯酸钠溶液等。

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　　1实验室的准备工作

　　本实验需要作好三项实验准备：一是提前配制各种母液；二是提前准备MS培养基；三是选择外植体并进行预处理。

　　1.1配制母液

　　母液中含有大量元素、微量元素、激素（植物生物调节剂）和维生素等有机成分，母液浓度是实际溶液浓度的5～10倍。配制母液花费时间多，需要用到溶量瓶、移液管等精密仪器，无法由每位学生亲自操作，教师可带领部分学生在课外进行。母液的类型和配制顺序如下：

　　配制母液的注意事项：⑴自来水或河水中含有大量的矿质元素，勿用配制母液；⑵配制大量元素和微量元素母液时，应将每种化合物单独溶解后，再一一混合，同时还应用适量的蒸馏水清洗烧杯内壁，并将清洗后的蒸馏水倒入混合溶液中，这样可以保证每种元素的浓度，混合时要按照教材附表中的顺序进行，最后加入的是氯化钙溶液，这样可以避免发生沉淀；⑶配制好的母液要先倒入1000ml烧杯中，再由烧杯转入1000ml细口瓶中，不可由容量瓶直接倒入细口瓶中；⑷注意观察母液中是否有絮状物，出现絮状物表明离子之间发生反应，需要重新配制母液；⑸植物生长调节剂难溶于水，需要碱或酸助溶，一般生长素类物质用碱（0.1mol/LNaOH1～3ml）或酒精（75～95％的酒精1～3ml）助溶，细胞分裂素类物质一般用酸（0.1mol/LHCL1～3ml）助溶，加入蒸馏水定溶时要缓慢，也可用水浴法助溶；⑹用棕色细口瓶盛装有机物母液和植物生长调节剂母液，避免透射光损害母液中的有机成分；⑺在瓶壁上贴好各种母液的标签（下图所示）；⑻将配制好的母液放入冰箱中或阴凉处保存。

　　MS是穆拉希吉（Murashige）和斯库克（Skoog）两位科学家第一个字母的缩写，他们于1962年为培养烟草而设计了一种培养基，这就是组培使用中最为广泛的MS培养基；标签中间一行的数字及单位表示的意义如下，例如，100ml/L，即配制1升培养基只需从母液中提取100ml即可；50mg/100ml，表明100ml母液中含有50mg萘乙酸，如取4mg的萘乙酸，只需提取8ml母液。

　　除母液需提前配制好外，消毒液也需要提前配制好。外植体消毒一般采用75％的酒精、2～10％的次氯酸钠溶液等。